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 SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（Serum-Free Medium for Lymphocyte）適用于小鼠淋巴細(xì)胞、DC 細(xì)胞的體外培養(yǎng)。本產(chǎn)品是一款化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的所有成分均使用細(xì)胞培養(yǎng)級別的原料生產(chǎn)，不含血清，有效避免血清質(zhì)量變動及血清組分、外源成分對實(shí)驗(yàn)研究的影響，可實(shí)現(xiàn)小鼠淋巴細(xì)胞、DC 細(xì)胞等免疫細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

使用方法：

例1：小鼠T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

1、 培養(yǎng)器皿的預(yù)包被：取 5μg/ml 小鼠 CD3 單抗包被培養(yǎng)器皿，4℃過夜或 37℃孵育 2 小時。使用前移除剩余包被液。

2、 將 SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基放置室溫平衡。

3、 無菌分離小鼠外周血淋巴細(xì)胞或脾臟淋巴細(xì)胞（建議使用達(dá)優(yōu)小鼠淋巴細(xì)胞分離

液：DKW33-R0100）。

4、 根據(jù)計數(shù)結(jié)果，用SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基將分離獲得的淋巴細(xì)胞按2-2.5×106 個/ml 的濃度接種于已包被小鼠 CD3 單抗的細(xì)胞培養(yǎng)器皿中，加入 5μg/ml 的小鼠 CD28 單抗、300U/ml 的 rmIL-2，刺激 T 淋巴細(xì)胞的生長和增殖，37℃，5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5、 觀察細(xì)胞活化狀態(tài)，每 2-3  天取樣計數(shù)細(xì)胞濃度并根據(jù)計數(shù)結(jié)果補(bǔ)充新鮮

SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（含 300U/ml 的 rmIL-2），調(diào)整細(xì)胞濃度為 1.5×106個/ml。

6、 收獲細(xì)胞供后續(xù)檢測或?qū)嶒?yàn)使用。

例2：小鼠骨髓DC細(xì)胞培養(yǎng)

1、 將 SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基放置室溫平衡。

2、 無菌分離小鼠骨髓單核細(xì)胞。根據(jù)計數(shù)結(jié)果，用 SuperCultureTM  小鼠淋巴細(xì)胞

培養(yǎng)基將分離獲得的單核細(xì)胞按 1-5×106 個/ml 的濃度接種于 6 孔板或 12 孔板中，每孔加入終濃度 200U/ml 的 rmGM-CSF 和 rmIL-4，37℃，5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

3、 48 小時后，輕輕晃動培養(yǎng)板，吸棄全部培養(yǎng)基及懸浮細(xì)胞，加含 200U/ml 的 rmGM-CSF 和 rmIL-4 的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

4、 隔日半量換液，即收集舊培養(yǎng)液，離心后用含 200U/ml 的 rmGM-CSF 和 rmIL-4

的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，然后再將細(xì)胞懸液放回原皿。

5、 第 6 天半量換液后加細(xì)胞因子 TNF-α 1000U/ml 或其他促成熟的細(xì)胞因子，繼

續(xù)培養(yǎng)兩天，以促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟（可在 TNF-α 加入前 1 天加入抗原，以獲得抗原負(fù)載的 DC）。

6、 收集懸浮和輕微貼壁的細(xì)胞，即為成熟的 DC。

保存方法：

2～8℃，避光保存，保持無菌，保質(zhì)期 12 個月。

注意：

本品避免反復(fù)凍融，使用時注意無菌操作。

本品培養(yǎng)T淋巴細(xì)胞時，加入2-5%的細(xì)胞培養(yǎng)添加物可增強(qiáng)細(xì)胞擴(kuò)增效率。

本品僅供研究使用。